Il-magna ta 'l-estrazzjoni u l-iskoperta ta' l-aċidu nuklejku kompletament awtomatika ta 'New Tech

Ħames saħħa:
● Strument ikkonfigurat bl-estrazzjoni tal-aċidu nuklejku u l-pass purifikat
● Strument ikkonfigurat b'modulu ta 'estrazzjoni ultrasoniku
● Strument ikkonfigurat b'kollox awtomatiku
● Strument ikkonfigurat b'amplifikazzjoni ta 'temperatura varjabbli
● Strument ikkonfigurat b'kit reaġent magħluq għal kollox

1.Jeħtieġ li r-reaġenti għall-iskoperta tal-aċidu nuklejku jiġu estratti u purifikati?
Il-prinċipju ta 'skoperta ta' aċidu nuklejku huwa kif ġej: taħt l-azzjoni ta 'primer, DNA polymerase tintuża biex twettaq amplifikazzjoni ta' reazzjoni katina fuq DNA/RNA template (li teħtieġ traskrizzjoni inversa ta 'NA), u mbagħad l-ammont ta' sinjal fluworexxenti rilaxxat jiġi skopert biex jiġi ddeterminat jekk il-kampjun fihx l-aċidu nuklejku (DNA/RNA) tal-patoġenu li jrid jiġi skopert.

1) Kampjuni li ma ġewx estratti jew purifikati jista 'jkun fihom ħafna komponenti li jaffettwaw ir-riżultat finali: nukleażi (li tista' tħoll l-aċidu nuklejku fil-mira u tikkawża negattiv falz), protease (li tista 'tnaqqas DNA polimerażi u tikkawża negattiv falz), metall tqil melħ (li jwassal għall-inattivazzjoni ta 'syntase u jikkawża pożittiv falz), PH aċiduż wisq jew alkalin wisq (li jista' jikkawża li r-reazzjoni tonqos), RNA mhux komplut (li jwassal għal falliment ta 'traskrizzjoni inversa negattiva falza).

2) Xi kampjuni huma diffiċli biex jamplifikaw direttament: Gram-pożittivi u xi parassiti, minħabba l-ħitan taċ-ċelluli ħoxnin tagħhom u strutturi oħra, jekk ma jgħaddux mill-proċess ta 'estrazzjoni u purifikazzjoni tal-aċidu nuklejku, il-kit mingħajr estrazzjoni jista' jonqos għal tali. kampjuni.

Għalhekk, huwa rrakkomandat li tagħżel il-kit tat-test jew l-istrument konfigurat mal-pass tal-estrazzjoni tal-aċidu nuklejku.

2. Estrazzjoni kimika jew estrazzjoni ta 'frammentazzjoni ultrasonika fiżika?
B'mod ġenerali, l-estrazzjoni kimika tista 'tiġi applikata għall-biċċa l-kbira tat-trattament minn qabel u l-Purifikazzjoni.Madankollu, f'batterji Gram-pożittivi b'ħitan ħoxnin u xi parassiti, huwa wkoll il-każ li l-estrazzjoni kimika ma tistax tikseb mudelli effettivi ta 'aċidu nuklejku, li jirriżulta f'detezzjoni negattiva falza.Barra minn hekk, l-estrazzjoni kimika ħafna drabi tuża aġenti qawwija, jekk l-elużjoni ma tkunx bir-reqqa, huwa faċli li tintroduċi alkali qawwija fis-sistema ta 'reazzjoni, li tirriżulta f'riżultati mhux preċiżi.

Il-frammentazzjoni ultrasonika tuża tgħaffiġ fiżiku, li ntuża b'suċċess minn GeneXpert, impriża ewlenija fil-qasam tal-POCT għall-użu mill-bniedem, u għandha vantaġġ assolut fl-estrazzjoni tal-aċidu nuklejku ta 'xi kampjuni kumplessi (bħal Mycobacterium tuberculosis).

Għalhekk, huwa rakkomandat li tagħżel kit tat-test jew strument ikkonfigurat bi pass ta' estrazzjoni ta' aċidu nuklejku.u huwa ottimali jekk ikun hemm modulu ta 'estrazzjoni ultrasoniku.

3. Manwal, Semi-awtomatiku u kompletament awtomatiku?
Din hija problema ta' spiża tax-xogħol u effiċjenza tax-xogħol.Fil-preżent, sptarijiet għall-annimali domestiċi mingħajr biżżejjed persunal, u l-estrazzjoni u l-iskoperta ta 'aċidu nuklejku huwa xogħol li jeħtieġ ċerti ħiliet u esperjenza.M'hemm l-ebda dubju li l-magna tal-estrazzjoni u l-iskoperta tal-aċidu nuklejku kompletament awtomatika hija l-għażla perfetta.

4. Amplifikazzjoni kostanti tat-temperatura jew amplifikazzjoni tat-temperatura varjabbli?
Ir-reazzjoni ta 'amplifikazzjoni hija rabta ta' skoperta ta 'aċidu nuklejku, u t-teknoloġija professjonali involuta f'din ir-rabta hija kumplessa.Bejn wieħed u ieħor, l-enzimi jintużaw biex jamplifikaw l-aċidu nuklejku.Fil-proċess ta 'amplifikazzjoni, is-sinjal tal-fluworexxenza amplifikat jew is-sinjal tal-fluworexxenza inkorporat jiġi skopert.B'mod ġenerali, iktar ma jidher kmieni s-sinjal tal-fluworexxenza, akbar ikun il-kontenut tal-ġene fil-mira tal-kampjun.

L-amplifikazzjoni tat-temperatura kostanti hija amplifikazzjoni tal-aċidu nuklejku f'temperatura fissa, filwaqt li l-amplifikazzjoni tat-temperatura varjabbli hija amplifikazzjoni ċiklika strettament skont l-estensjoni tad-denaturazzjoni-ittemprar.Il-ħin ta 'amplifikazzjoni tat-temperatura kostanti twettaq, filwaqt li l-ħin ta' amplifikazzjoni tat-temperatura varjabbli huwa affettwat ħafna mir-rata ta 'żieda u tnaqqis fit-temperatura tal-istrument (fil-preżent, ħafna manifatturi setgħu jagħmlu 40 ċiklu ta' amplifikazzjoni f'madwar 30 minuta).

Jekk il-kundizzjonijiet tal-laboratorju huma tajbin u t-tqassim f'żoni huwa strett, huwa raġonevoli li wieħed jgħid li d-differenza ta 'preċiżjoni bejn it-tnejn mhux se tkun kbira.Madankollu, l-amplifikazzjoni tat-temperatura varjabbli se tisintetizza aktar prodotti ta 'aċidu nuklejku fi żmien relattivament iqsar.Għal laboratorji mingħajr żona stretta u persunal ta 'taħriġ professjonali, ir-riskju ta' tnixxija ta 'aerosol ta' aċidu nuklejku se jkun akbar, il-pożittiv falz iseħħ ladarba sseħħ it-tnixxija, u li huwa estremament diffiċli biex jiġi eliminat.

Barra minn hekk, l-amplifikazzjoni tat-temperatura kostanti hija wkoll aktar suxxettibbli għal amplifikazzjoni mhux speċifika meta l-kampjun ikun kumpless (it-temperatura relattiva tar-reazzjoni hija aktar baxxa, u iktar ma tkun għolja t-temperatura tal-estensjoni, aħjar tkun l-ispeċifiċità tal-irbit tal-primer).

Safejn hija kkonċernata t-teknoloġija attwali, l-amplifikazzjoni tat-temperatura varjabbli hija aktar affidabbli.

5. Kif tevita r-riskju ta 'tnixxija ta' prodotti ta 'amplifikazzjoni ta' aċidu nuklejku?
Fil-preżent, ħafna manifatturi jagħżlu t-tubu PCR tat-tip tal-glandola bħala t-tubu tar-reazzjoni tal-aċidu nuklejku, li huwa ssiġillat bil-frizzjoni, u d-denaturazzjoni tat-temperatura fid-denaturazzjoni tat-temperatura varjabbli fl-amplifikazzjoni tal-PCR b'temperatura varjabbli tilħaq 90 grad
Ċentigradi.Il-proċess ripetut ta 'espansjoni bis-sħana u kontrazzjoni bil-kesħa huwa sfida kbira għas-siġillar tat-tubu PCR, u t-tubu PCR tat-tip tal-glandola huwa relattivament faċli li jikkawża tnixxija.

Huwa preferibbli li tadotta r-reazzjoni b'kit/tubu kompletament issiġillat biex tevita t-tnixxija tal-prodott tar-reazzjoni.Ikun perfett jekk jista 'jkun hemm xogħol ta' kit kompletament issiġillat għall-estrazzjoni ta 'aċidu nuklejku u skoperta.

Allura l-magna ġdida ta 'estrazzjoni u skoperta ta' aċidu nuklejku kompletament awtomatika ta 'New Tech għandha l-ħames għażliet ottimali ta' hawn fuq.